咨询热线：
18117073214
产品说明
T4多聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链DNA或 RNA）的5´ -羟基末端以及3´ -单磷酸核苷上。本酶为修饰后的T4PNK，具有所有激酶的活性，但是缺失了3´磷酸酶活性。 尤其适用于将3´ 已经磷酸化的单核苷酸5´磷酸化，制备pNp底物；以及3´端有磷酸基团的寡核苷酸的5´端进行磷酸化标记。 未改造的野生型T4多聚核苷酸激酶（AE1001）还具有3´磷酸酶活性，将3´ -磷酸基团从寡核苷酸的3´磷酸末端、脱氧3´-单磷酸核苷和脱氧3´ -二磷酸核苷上水解掉。
本公司T4 PNK(3´磷酸酶活性缺失) 是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1活性单位指在37℃下，1× T4 PNK反应缓冲体系下，30 min内将1 nmol ATP上的磷酸基团掺入酸不溶性物质所需的酶量。
活性测定条件
1× T4 PNK Buffer：70 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，5 mM DTT(pH 7.6 @ 25°C)，37℃温育。
浓度：10U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与适用范围
Ø DNA或RNA 5´末端的磷酸化，以便进行连接反应
Ø DNA或RNA的末端标记，用作探针和进行DNA测序
Ø T4多聚核苷酸激酶（缺失3´磷酸酶活性）将3´ 已经磷酸化的单核苷酸5´磷酸化，制备pNp底物，用于添加到DNA或RNA的 3´端
Ø 用T4多聚核苷酸激酶（缺失3´磷酸酶活性）对3´端有磷酸基团的寡核苷酸的5´端进行标记
产品包装规格及组成
Component | AE1002A | AE1002B |
T4 PNK(3´磷酸酶活性缺失) | 200U | 1000U |
10× T4 Polynucleotide Kinase Buffer | 0.3ml | 1.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT， 0.1 mM EDTA，50% Glycerol，0.1 µM ATP ，pH 7.4 @ 25°C
相关产品
AE1301: T4 DNA ligase
应用实例
1. 引物或PCR产物磷酸化
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积活浓度 |
10× Buffer | 5 |
ATP（50mM） | 0.5-1 |
待磷酸化引物（100uM）或PCR产物 （100ng-2ug/ul） | 20 |
T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl) | 1 |
H2O | Xul |
总体积 | 50 |
2）37℃×30-120min反应，
3）65℃×20min失活
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 热失活：65°C加热20分钟。
l 达到最佳酶活力，需要新鲜缓冲液（在旧缓冲液中，由于氧化造成的DTT含量减少会降低酶活力）。
l 放射性标记反应：50 μl反应体系中，用 1×T4多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol的 γ-[32P] ATP和20单位的酶37℃温育30分钟可催化1-50 pmol的5´末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP作标记反应。
l CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及dTTP均可替代ATP作为磷酸供体。
l 要提高平齐末端或5´凹陷末端的磷酸化效率，可在加入T4多聚核苷酸激酶前，先将DNA溶液于70℃加热5分钟，然后冰上冷却，并加入5%（w/v）的PEG-8,000。
l T4多聚核苷酸激酶需要ATP才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含ATP。
l 一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中37℃温育30分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它DNA片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活T4多聚核苷酸激酶。
