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T7 RNA Transcription Kit | 目录号：AK0701 | 使用前请仔细阅读说明书 |
Component | AK0701A（50T） | AK0701B（250T） |
5× Reaction Buffer* | 200μL | 1000μL |
100mM ATP Solution | 100μL | 500μL |
100mM GTP Solution | 100μL | 500μL |
100mM UTP Solution | 100μL | 500μL |
100mM CTP Solution | 100μL | 500μL |
Enzyme Mix | 75μL | 375μL |
DNase I | 50μL | 250μL |
Control Template(0.5μg/μL) | 10μL | 50μL |
Nuclease-free H2O | 1mL | 5mL |
注：5× Reaction Buffer储存在-70℃，可能会产生白色沉淀，如果有白色沉淀产生，将试剂管加热至37℃ 5min 并且充分混合使其溶解后使用.
产品说明：
T7 RNA polymerase是T7噬菌体编码的一种DNA依赖的RNA聚合酶，对T7噬菌体启动子具有高度特异性。在T7启动子的指导下，利用DNA作为模板，利用四种核糖核苷三磷酸作为底物，合成与模板链互补的单链RNA。也能够以修饰核苷为底物产生染料、生物素或者放射性标记的RNA；以帽子结构或者帽子类似结构为底物产生加帽的RNA。体外合成的RNA适合于基因编辑的sgRNA, 体外翻译中mRNA的合成等。线性质粒、PCR 产物均可用作体外合成 RNA 的模板。
本体外转录试剂盒的反应体系经过优化，有着很高的合成量。在加入1ug 1kb DNA模板的情况下，20ul反应可以合成最高达50-100μg的RNA，可放大用于产生毫克级别RNA。转录合成的RNA可用于如RNA结构与功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi、基因编辑等应用，也可通过牛痘病毒加帽系统和2'-O-甲基转移酶加帽，E.coli Poly(A)Polymerase加尾产生mRNA，用于体外翻译、转染、显微注射或其它下游应用。
特点：
l 合成 RNA的长度和产量大大提高；
l 内含核酸酶抑制剂，防止RNA降解；
适用范围
l 体外转录制备各种RNA分子，包括mRNA、sgRNA、RNA标准品、RNA疫苗合成等
l 制备放射性标记RNA探针、荧光标记RNA探针
l 制备反义RNA，调控表达
l 制备基因编辑的引导RNA（sgRNA）、Cas核酸酶核酸检测的sgRNA
l 合成用于体外翻译和微量注射的mRNA
l RNA疫苗的制备
l NASBA等温扩增。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
应用举例：
线性化双链DNA或目的DNA序列上下游有T7 Promotor序列和T7 Terminaroe序列的环状质粒。
1. 将以下组分加入一个无核酸酶污染的 PCR 管中：
组份 | 体积/μl |
100mM ATP Solution | 2μL |
100mM GTP Solution | 2μL |
100mM CTP solution | 2μL |
100mM UTP solution | 2μL |
Template DNA | 1μg* |
5× Reaction Buffer | 4μL |
Enzyme Mix | 2μL |
Nuclease-free H2O | to 20μL |
* 转录产量取决于模板的添加量，DNA 的使用量一般为 100ng～1 μg。
2. 充分混合，37℃反应 1-2h。
3. 加入1μL DNase I（RNase-free），充分混合，37℃反应30min。
4. RNA电泳检测转录产物长度和浓度。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
-20℃保存2年。
相关产品
牛痘病毒加帽系统（AE0909），2'-O-甲基转移酶（0908），E.coli Poly(A)Polymerase（0901）。
注意事项：
l 为了保证RNA产物的均一性，DNase I消化去除DNA尽量彻底。
l 为了降低RNaseA 污染可能造成的 RNA 降解，导致体外转录失败，强烈建议每个反应加 1μl RNase Inhibitor。
l RNA 相关实验严格防止RNase A 污染，操作时需佩戴一次性口罩与手套，并及时更换。
l RNA 在碱性条件下不稳定，避免用高 pH 值溶液溶解 RNA。
l 若环状质粒上需要转录的目的DNA序列的上下游有T7 Promotor序列和T7 Terminaroe序列，则可以利用环状质粒作为DNA模板直接转录，不需要线性化载体
