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一步法sgRNA合成试剂盒S.pyogenes | 目录号：AK0708 | 使用前请仔细阅读说明书 |
Component | AK0708A（50T） | AK0708B（250T） |
5× Reaction Buffer* | 200μL | 1000μL |
100mM ATP Solution | 100μL | 500μL |
100mM GTP Solution | 100μL | 500μL |
100mM UTP Solution | 100μL | 500μL |
100mM CTP Solution | 100μL | 500μL |
Enzyme Mix | 75μL | 375μL |
DNase I | 50μL | 250μL |
Spy sgRNA DNA Template(0.5μg/μL) | 50μL | 250μL |
Nuclease-free H2O | 1mL | 5mL |
产品说明：
T7 RNA polymerase是T7噬菌体编码的一种DNA依赖的RNA聚合酶，对T7噬菌体启动子具有高度特异性。在T7启动子的指导下，利用DNA作为模板，利用四种核糖核苷三磷酸作为底物，合成与模板链互补的单链RNA。本体外转录试剂盒专门用于S.pyogenes Cas9核酸酶的sgRNA体外转录反应，试剂盒组份包括体外转录的所有试剂盒S.pyogenes sgRNA转录反应的DNA模板。
本体外转录试剂盒的反应体系经过优化，sgRNA合成量，使用方便。在加入0.5ug DNA模板的情况下，50ul反应可以合成最高达50-100μg的sgRNA，可放大至毫克级别sgRNA的制备。
特点：
l 合成 S.pyogenes的Cas9核酸酶的sgRNA，产量大大提高；
l 内含核酸酶抑制剂，防止sgRNA降解。
适用范围
l 制备S.pyogenes Cas9核酸酶基因编辑的引导RNA（sgRNA）
l 进行基因编辑
线性化双链DNA或目的DNA序列上下游有T7 Promotor序列和T7 Terminaroe序列的环状质粒。
1. 将以下组分加入一个无核酸酶污染的 PCR 管中：
组份 | 体积/μl |
100mM ATP Solution | 2μL |
100mM GTP Solution | 2μL |
100mM CTP solution | 2μL |
100mM UTP solution | 2μL |
Template DNA | 1μg* |
5× Reaction Buffer | 4μL |
Enzyme Mix | 2μL |
Nuclease-free H2O | to 20μL |
* 转录产量取决于模板的添加量，DNA 的使用量一般为 100ng～1 μg。
2. 充分混合，37℃反应 1-2h。
3. 加入1μL DNase I（RNase-free），充分混合，37℃反应30min。
4. RNA电泳检测转录产物长度和浓度。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
-20℃保存2年。
注意事项：
l 为了保证RNA产物的均一性，DNase I消化去除DNA尽量彻底。
l 为了降低RNaseA 污染可能造成的 RNA 降解，导致体外转录失败，强烈建议每个反应加 1μl RNase Inhibitor。
l RNA 相关实验严格防止RNase A 污染，操作时需佩戴一次性口罩与手套，并及时更换。
l RNA 在碱性条件下不稳定，避免用高 pH 值溶液溶解 RNA。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
