产品说明
热稳定 Flap 核酸内切酶 1 (FEN1) 催化切除双链核酸中分叉的DNA和RNA flap 结构,产生 5´ 磷酸末端。在体内,FEN1 是冈崎片段加工成熟的基本元件,并参与碱基切除修复过程。
本公司Thermostable FEN1是重组表达,并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1 单位指在65℃ 条件下,10 分钟内切割 10 pmol 含 5´ flap 结构(20nt flap)的寡核苷酸底物所需要的酶量。
活性测定条件
1×AM Buffer E:20 mM Tris-HCl,10 mM (NH4)2SO4,10 mM KCl,10 mM MgSO4,0.1% Triton X-100 (pH 8.8 @ 25℃),65℃温育。
浓度:32U/ul
保存条件:-20℃可保存2年,避免反复冻融
特点与应用
Ø 切除 DNA flap、RNA flap结构;
Ø 热稳定酶,95度温育30分钟剩余活性大于90%。
产品包装规格及组成
Component | AE2402A | AE2402B |
Thermostable FEN1 | 1600U | 8000U |
0.2ml | 1.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
10 mM Tris-HCl,1 mM DTT,100 mM KCl,0.1 mM EDTA,0.1% Triton® X-100,50% Glycerol,pH 7.4 @ 25°C
1. 酶切反应
1)按下表配制反应体系
反应组分 | ul |
10×AM Buffer E | 2 |
底物:5’Flap结构的DNA或RNA | 5-50pmole |
Thermostable FEN1 (32U/µl) | 1-2 |
H2O | Variable |
总体积 | 20 |
2)50-70°C温育15-30min
3)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测酶切产物。
警告: 本产品仅限科研实验使用,临床应用安全性和有效性未鉴定,不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 不能热失活,可以通过加入蛋白酶K消化失活,或酚氯仿抽提失活。