产品说明
T7 核酸内切酶I识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA、异源双链DNA或者以更慢的速度切割含切刻的双链DNA。该酶切割错配碱基5´端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。
本公司T7 核酸内切酶 I是重组表达,并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1活性单位指在37℃下, 10×T7核酸内切酶I反应缓冲体系下,1小时将90%以上的1 μg超螺旋十字型结构的pUC(AT)* 转化成 90% 以上的线性结构所需要的酶量。
活性测定条件
1×AM Buffer B:50 mM NaCl,10 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2 ,1 mM DTT(pH 7.9 @ 25℃),37℃ 温育。
浓度:10U/μl
保存条件:-20℃可保存2年,避免反复冻融
特点及应用
Ø 识别错配 DNA
Ø 分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA
Ø 检测或切割异源二聚体 DNA 和切刻 DNA
Ø 随机切割线性 DNA 进行 shot-gun 克隆
Ø 基因突变、SNP、TALEN 或 CRISPR/Cas9 形成的突变 体检测
产品包装规格及组成
Component | AE2401A | AE2401B |
T7 endonuclease I | 250U | 1250U |
10×AM Buffer B | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl,200 mM NaCl,1 mM DTT,0.1 mM EDTA,50% Glycerol,0.15% Triton® X-100,pH 7.5 @ 25°C
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应用实例
1. 错配碱基对酶切反应/SNP检测
1)按下表配制反应体系
反应组分 | ul |
10× Buffer | 5 |
错配DNA | 1ug |
T7内切核酸酶I (10U/µl) | 1-2 |
H2O | Variable |
总体积 | 50 |
2) 37°C反应30min;
3) 65℃加热15min,或加入EDTA至总浓度为10mM,终止反应;
4) 电泳检测DNA水解结果。
警告: 本产品仅限科研实验使用,临床应用安全性和有效性未鉴定,不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l T7 核酸内切酶 I 是一种具有底物结构选择性的酶。该酶以不同的活性作用于不同的 DNA 底物。切割特定底物时,必须控制酶量和反应时间。
l 反应温度超过 42℃ 时,会增加非特异性核酸酶活性。