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产品说明
耐热 UDG 水解 DNA 链中的尿嘧啶碱基和脱氧核糖之间的 N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。本酶可作用于含有 dU的单链或双链 DNA，对 RNA 无活性。本酶来源于嗜热微生物，在高温下具有更高酶活性。
PCR反应的高温，特别是变性和延伸反应阶段，会导致dCTP脱氨基生成dUTP，dUTP被聚合酶掺入DNA中形成dU；同时高温还会使DNA中的dC碱基脱氨基生成dU碱基。这些DNA中的dU碱基会抑制DNA高忠实性DNA聚合酶（例如Pfu DNA聚合酶）的活性。因此消除DNA中的dU碱基能够促进高忠实性DNA聚合酶的扩增产量。本公司的高温UDG酶，能够耐受95℃高温，95℃半衰期超过1小时。因此该高温UDG使提高高忠实性DNA聚合酶（例如Pfu DNA聚合酶）扩增产量的良好促进剂。
本公司高温UDG是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
在 65℃条件下每分钟从含尿嘧啶双链 DNA（dU/dA）上催化释放 60 pmole尿嘧啶所需要的酶量，定义为 1 个活性单位
活性测定条件
Pfu PCR Buffer：20 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25°C), 10 mM (NH4)2SO4, 10 mM KCl, 0.1 mg/mL BSA, 0.1% (v/v) Triton X-100, 2 mM MgSO4，65℃温育。
浓度：2U/ul
保存条件：-20℃
特点
Ø 热稳定，50-90℃高温下仍具有酶活性；
Ø 在多种 PCR酶 buffer中具有活性。
应用范围
Ø 消除DNA中高温产生的dU碱基，改善高保真聚合酶扩增性能。
Ø 其它需要高温下去除dU的实验操作
产品包装规格及组成
Component | AE1103A | AE1103B |
高温UDG | 200U | 1000U |
10×UDG Buffer | 0.5 ml | 1.5 ml |
质量控制
无内切酶和外切酶活性：50 U 的本酶和1 μg的 pBR322 DNA 在 37℃下反应 2 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。
酶贮存缓冲液
20mM Tris-HCl (pH7.5),100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween20, 50% glycerol
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应用举例
改善PCR扩增效果的使用方法
1. 按如下表格配制PCR反应液
PCR 组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×Pfu酶Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
Pfu DNA聚合酶（2U/μl） | 0.5 | 1U |
耐热UDG（2U/μl） | 1.0 | 2U |
ddH2O | Varable | / |
总体积 | 50 | / |
2. PCR反应。
3. 电泳检测PCR扩增结果。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 耐热UDG酶的反应温度可以在 40℃-95℃ 的范围内变化，建议在 50-70℃反应。
l UDG切割含dU碱基的ssDNA活性最高，大概是dU/dA双链DNA的5-10倍，各种底物的活性顺序为：dU/dA < dU/dG < dU/dC ≈ dU/dT < ssDNA。
l 长期储存 (非频繁使用; 每月 1-2次): -70℃；每天或每周使用: -20℃。尽量避免多次冻融， 切勿暴露在温度波动较大之处。温度波动对产品的稳定性有极大影响。
l 在用于Pfu DNA聚合酶等高忠实性DNA聚合酶的PCR反应时，可以于高温内切核酸酶IV共同使用，进一步提高DNA扩增产量和扩增忠实性。本公司有售超耐热内切核酸酶IV（目录编号AE1145）。
