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产品说明
T7 RNA polymerase是T7噬菌体编码的一种DNA依赖的RNA聚合酶，用于体外RNA合成，对T7噬菌体启动子具有高度特异性。在T7启动子的指导下，利用DNA作为模板，合成与模板连互补的正义或反义 RNA。正义或反义 RNA 链取决于模板 DNA 序列与 T7 启动子的位置，DNA 位于 T7 启动子的下游，T7 RNA 聚合酶会转录出正义 RNA，反之则为反义 RNA 链。使用T7 RNA polymerase体外合成的RNA适合于许多研究和生物技术应用，例如基因编辑的sgRNA, 体外翻译中mRNA的合成等。双链线性平末端或 5’突出末端 DNA 均可作为 T7 RNA Polymerase 的底物模板，因此线性质粒、PCR 产物均可用作体外合成 RNA 的模板。
本公司T7 RNA polymerase是在大肠杆菌中重组表达，并多步纯化的重组酶。
活性定义
1单位指在温度为37℃，1× T7 RNA polymerase 反应缓冲体系的条件下，60min将1 nmol ATP掺入酸不溶性物质所需的酶量。
活性测定条件
40 mM Tris-HCl ，6 mM MgCl2 ，1 mM DTT ，2 mM spermidine (pH 7.9 @ 25℃)，37℃温育。
浓度：50U/μl
保存条件：-20℃保存
特点
Ø 转录活性高，NTP浓度范围为0.2-10mM
Ø T7启动子短小简单，容易设计合成
适用范围
Ø 体外转录制备各种RNA分子，包括mRNA、sgRNA、RNA标准品、RNA疫苗合成等
Ø 制备放射性标记RNA探针、荧光标记RNA探针
Ø 通过反义RNA调控表达
Ø 基因编辑的引导RNA（sgRNA）
Ø 合成用于体外翻译和微量注射的mRNA
产品包装规格及组成
Component | AE0701A | AE0701B | AE0701C | AE0701D |
T7 RNA polymerase | 5kU | 25kU | 100kU | 250kU |
10 × T7 RNA polymerase Buffer | 1.0ml | 1.0 ml×3 | 5.0 ml×3 | 5.0 ml×5 |
DEPC H2O | 1.0ml×4 | 5ml×4 | 100ml | 200ml |
质量控制
相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。
酶贮存缓冲液
10mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 1 mM EDTA , 0.1% (v/v) Triton X-100, 50% Glycerol , 25°C pH 7.5
相关产品：
AE2081: DNase I (RNase-free )，AE2503、AE2504 RNase抑制剂
应用实例
1. RNA转录
1）按下表配制反应体系
反应组分 | ul |
10× Buffer | 5 |
NTP（10mM ATP,GTP,TTP,CTP） | 5 |
模板DNA | 1µg |
RNase Inhibitor （40U/μl） | 1 |
T7 RNA polymerase (50U/µl) | 1 |
DEPC -treated H2O | Variable |
总体积 | 50 |
2) 37℃孵育1-2h。
3) 如需去除模板DNA，可用DNase I（2U）37℃处理15min。
4) 终止反应：70℃加热10min，或加入2μl 0.5M的EDTA (pH8.0)。
5) 电泳检测RNA转录产物和产量。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 对于放射性标记的高比活度核糖核酸探针，其放射性核苷酸浓度应控制在6μM以内
l 为了保护合成的RNA免于降解，建议RNase抑制剂添加到1U/μl的最终浓度
l T7 RNA polymerase对盐浓度较敏感，总盐浓度不应超过50mM。
