产品说明

牛痘病毒加帽体系利用牛痘病毒加帽酶及其它组份，将 7-甲基鸟苷帽结构（Cap 0）加到 RNA 的 5´ 末端。在真核生物中，末端7-甲基鸟苷帽结构帽结构影响到 mRNA 的稳定、转运和翻译。使用酶促反应为 RNA 加帽是一种简单有效的方法，对用于体外转录、转染和显微注射的 RNA，能改善其稳定性和翻译能力。另外，反应中所用到的标记 GTP 还能提供一种便捷的标记方法，将 5´ 末端带有三磷酸的任何 RNA 进行标记。

牛痘病毒加帽酶由两个亚基（D1 和 D12）组成， D1 亚基为mRNA-capping enzyme catalytic subunit，具有 RNA 三磷酸水解酶/RNA triphosphatase、鸟苷转移酶/guanylyltransferase、鸟嘌呤甲基转移酶/guanine methyltransferase共三种酶活性；D12 亚基为mRNA-capping enzyme regulatory subunit，调控D1亚基的加帽活性。这些活性都是添加一个完整的 Cap 0 结构，即 m⁷Gppp (5´ ) N 所必需的。加帽反应不仅高效，可以达到100%；而且方向正确，不像共转录会添加上一些帽类似物。 

本公司mRNA-capping enzyme是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1活性单位指在37℃下， 1×mRNA-capping反应缓冲体系下，60 min内将10 pmol GTP掺入到1条 80 个核苷酸的转录产物上所需的酶量。

活性测定条件

1×加帽反应缓冲液：50 mM Tris-HCl（pH 8.0），5 mM KCl，1 mM DTT，1 mM MgCl₂，0.5 mM GTP，0.1 mM SAM，37℃ 温育。 

浓度：10U/μl

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点与应用

Ø 体内或体外翻译前 mRNA 的加帽

Ø 标记 mRNA 5´ 末端

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。无单链或双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶和 RNase 污染。

酶贮存缓冲液

20 mM Tris-HCl，pH8.0，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100，50% Glycerol。

使用实例：

1）按下表配制反应体系

2）37℃×60min反应，

3）75℃×15min失活酶，

4）尿素变性PAGE电泳检测酶切产物，或按实验目的进行后续操作。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l 可以在反应体系中加入核酸酶抑制剂来防止RNA的降解

l GTP和SAM都是加帽反应的必需底物，缺一不可。

• 文档1