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多片段重组克隆试剂盒
保存条件：-20°C，使用过程中避免反复冻融。
产品组成
组份 | GA02A | GA02B | GA02C |
次数 | 20次 | 50次 | 100次 |
5 × 重组Buffer | 80 μl | 200ul | 400ul |
重组酶 | 40 ul | 100ul | 200ul |
1kb control insert 混合物(20 ng/μl×3) | 5 μl | 5 μl | 5ul |
linearized control vector (50 ng/μl, Amp+) | 5 μl | 5 μl | 5ul |
产品说明
本试剂盒为多片段基因重组克隆试剂盒， 试剂盒经过特殊优化，显著提高了菌落数与阳性克隆率等。
重组克隆是一种简单、快速、高效的 DNA 无缝克隆技术，可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。首先将载体线性化，可以利用反向 PCR 或限制性内切酶进行载体线性化。通过在目的基因 PCR 引物的5'端加入15-20 个碱基，该15-20个碱基和载体的末端序列同源，从而使得目的基因和线性化载体二者末端的15-20个碱基相同。将目的基因PCR 产物和线性化载体按一定比例混合后，在重组酶作用下， 50°C 反应 15-30 min 即可进行转化，完成定向克隆。
本公司重组克隆试剂盒基于独特的非连接酶依赖体系，极大地降低了载体自连背景，阳性克隆率可达 95％以上。改良的重组酶与优化的反应缓冲液，显著提高重组效率，线性化载体与插入片段无需进行纯化，可直接用于重组反应，极大地简化了实验步骤。
多片段重组原理图
特点 | 适用范围 |
◇多片段随意拼装大片段 | ◇快速克隆 |
◇克隆位点任意选择 | ◇高通量克隆 |
◇PCR 产物直接克隆 | ◇无缝克隆 |
◇多基因同时克隆 | ◇DNA 定点突变 |
◇阳性克隆率高 | |
◇操作简单 |
l 制备线性化载体和插入片段的相关试剂
l 化学感受态细胞：
DH5a Competent cell 常规克隆，适用于<15 kb 质粒；
XL10 Competent cell 大片段克隆，适用于>10 kb 质粒；
l 其他材料：ddH20 、PCR 管、PCR 仪等。
详见附件
