产品说明

本酶具有以ATP作为辅因子，连接与同一互补DNA链杂交的相邻寡核苷酸链的5´磷酸末端和3´羟基末端从而形成磷酸二酯键的连接酶活性，且必须同时满足两条寡核苷酸与互补DNA链完全配对和两链之前没有间隙（gap）的条件才能反应。本酶耐热性好，在45-70℃区间内均有活性。

本公司9°N DNA ligase是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1 单位指在温度为45℃，1× 9°N DNA ligase Buffer缓冲体系的反应条件下，15min内能连接50%的被BstEII消化的 1ug λ DNA片段（约相当于0.036pmole 12 bp 粘性末端）所需的酶量，粘性末端活性单位相当于切刻封闭单位。

活性测定条件

10 mM Tris-HCl ，600 µM ATP，2.5 mM MgCl₂，2.5 mM DTT，0.1% Triton X-100 (pH 7.5 @ 25℃)，45℃ 温育。

浓度：40U/μl

保存条件：-20℃保存

特点

Ø 耐热性好，兼容 连接酶链式反应（ligase chain reaction, LCR）模板预变性步骤；

Ø 忠实性极高，缺口处错配碱基对不会被连接

Ø 可在高温条件下连接DNA链上的切刻位点。

Ø 与常温 DNA 连接酶相比，具有更高的连接特异性和较低的非特异性背景。

Ø 与 Taq DNA 连接酶相比，具有更高的连接特异性和较低的非特异性背景。

Ø 反应温度范围为 35-70度，高温下特异性和活性增强，反应温度可接近 80℃。

适用范围

Ø 通过连接酶检测反应（LDR）和连接酶链式（LCR）反应，检测等位基因特异性

Ø 连接酶链式反应（LCR）中连接磷酸化寡核苷酸

Ø 高温下连接 DNA 链上的切刻位点

产品包装规格及组成

质量控制

相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。

酶贮存缓冲液

10 mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，200 µg/ml BSA，50% Glycerol，10 mM (NH₄)₂SO₄，pH 7.4 @ 25°C。 

注意事项

l 本产品需要辅助因子ATP参与反应

l 本产品可有效连接 12 bp 的互补片段，但无法连接 4 bp 的互补片段（典型限制酶消化产物）。

l 本产品不能替代T4 DNA ligase（目录号AE1301）

相关产品

AE1308: Taq DNA ligase；AE1307: Pfu DNA ligase；

应用实例

1. 连接反应

1）按下表配制反应体系

2）45-50°C连接15min

3）对于较长的双链DNA底物，琼脂糖电泳检测连接产物；对于短于100bp的短片段DNA，聚丙烯酰胺凝胶电泳检测连接产物。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

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