产品说明

核酸内切酶V也称为脱氧次黄嘌呤3´内切酶，是一种DNA 修复酶，识别DNA中的脱氧次黄嘌呤（dI）碱基的双链（无论配对与否）或单链DNA，即腺嘌呤的脱氨基产物，并在dI的3’端的第一、二个磷酸二酯键切断DNA链，产生一个3´ 羟基、5´ 磷酸的切口。也可识别RNA中的次黄嘌呤碱基I，并在I碱基下游第一、二个磷酸二酯键切断RNA链。也可识别含脱碱基（AP）位点或尿素、碱基错配、插入/缺失错配、发夹结构、未配对 loop 环、折叠 flaps 和类-Y 型结构的DNA，但是识别后者的能力不如前者。最新报导表明内切核酸酶V还可以识别RNA中的次黄嘌呤碱基（I），并主要在I碱基3’端的第二个磷酸二酯键切断RNA链。本公司耐热内切核酸酶V来自嗜高温微生物。

本公司耐热内切核酸酶V是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1单位指在温度为55℃，1×内切核酸酶V应缓冲体系的条件下，60 min内切割 1 pmol 含单一脱氧次黄嘌呤核苷位点的34 bp寡核苷酸双链所需的酶量。

活性测定条件

AM Buffer D，55℃ 温育。

含脱氧次黄嘌呤底物的制备：合成中间掺入了脱氧次黄嘌呤（dI）碱基的34 nt寡核苷酸单链，与互补单链（与dI配对碱基为T）退火配成双链寡核苷酸。 

浓度：10U/μl

保存条件：-20℃保存

特点

Ø 高温酶，在30-85℃均有活性

Ø 热失活：加入终浓度0.2N的NaOH，95℃ 加热5min。或酚氯仿抽提。

适用范围

Ø 切割含脱氧次黄嘌呤碱基的DNA寡核苷酸

Ø 切割含次黄嘌呤碱基的RNA寡核苷酸

Ø 错配碱基对的切割 ，但结合力与切割活性很弱（相比次黄嘌呤碱基）

产品包装规格及组成

质量控制

相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。

酶贮存缓冲液

10 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，200 µg/ml BSA ，0.15% Triton® X-100，50% Glycerol ，pH 8 @ 25°C。 

应用举例

切断单链或双链DNA中dI碱基下游的磷酸二酯键

1) 按如下表格配制反应液

2) 55-65°C反应30-60min。

3) 8M尿素变性PAGE电泳检测切割效果

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l 内切酶V在AM buffer A、B、D2中具有100%活性，在AM buffer C中只有75%活性。

l 热碱处理失活酶的情况下，若碱影响下游实验，需要加入等量的HCl对碱进行中和。

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