产品说明

RNase A是一种RNA特异性的核酸内切酶，分子量13.7kDa，含有4对二硫键。特异性在尿嘧啶和胞嘧啶的３’磷酸处切断磷酸二酯键，特异攻击 RNA 上嘧啶核苷酸的C′3上的磷酸根和相邻核苷酸的C′5之间的键，产物为3′嘧啶单核苷酸或以3′嘧啶核苷酸结尾的低聚核苷酸。不水解嘌呤碱基3’端的磷酸二酯键。RNase A等电点为pH9.6，是一种碱性蛋白质，最适反应温度为60度，一般用于在20-70度消化各种单链RNA分子。单链RNA是优势底物，双链RNA的切割活性很低。钾盐和钠盐对RNase A的活性有促进作用。RNase A主要用于除去样品中的RNA污染，例如去除质粒DNA和基因组DNA抽提物中的RNA。另外，可除去 DNA:RNA或RNA:RNA杂合体中未杂交的 RNA区；可用来确定 DNA 或 RNA 中单碱基突变的位置, 用标记了的RNA探针与待检含单碱基置换的DNA或RNA退火，RNA：RNA或RNA：DNA中的错配碱基可被RNase A切割。

本公司牛胰RNase A来源于牛胰腺，多不纯化而得。不含其它核酸酶、蛋白酶和 DNA。

活性定义

1活性单位指在100 mM Tris-acetate (pH 6.5), 1 mM EDTA, 1 mM cyclic 2', 3'-CMP反应体系中，1ml反应体积下，37℃反应1 min使286nm下的吸收值增高0.0146所需的酶量。1U等价于0.1177 Kunitz 单位。

活性测定条件

100 mM Tris-acetate (pH 6.5), 1 mM EDTA, and 1 mM cyclic 2', 3'-CMP反应体系，1ml反应体积，37℃反应。

浓度：10mg/ml

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点与应用

Ø  不含其他核酸酶和蛋白酶

Ø  DNA和蛋白样品中RNA的去除。

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

10mM Tris·HCl (pH7.5)，15mM NaCl，50%甘油

使用实例：

1、DNA样品中RNA的去除

1）按下表配制反应体系

2）37-60℃×60min反应，

3）琼脂糖电泳检测酶切效果，或按实验目的进行后续操作。

2、质粒抽提实验去除RNA分子

1）RNase A的加入

方法1）：直接在溶液III中加入2-5mg RNase A

方法2）：在加入溶液III中和溶液II的溶液中，加入10ul RNase A

2）冰上或常温放置8-15分钟，消化溶液中的RNA分子

3）进行下一步质粒抽提操作。

3、其它需要消化RNA的实验

1）按下表配制反应体系

2）37-60℃×60min反应，

3）琼脂糖电泳检测酶切效果，或按实验目的进行后续操作。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  RNase高度选择性消化单链RNA

l  存在二级结构的rRNA或双链RNA需要提高反应温度

l  可以添加2M尿素消除RNA二级结构，提高消化效率

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