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产品说明
Pfu DNA 聚合酶是大肠杆菌重组表达的嗜热古细菌 Pyrococcus furiosus 来源的热稳定型 DNA 聚合酶，分子量为 90 KD。其保真性是普通 Taq DNA 聚合酶的 18 倍左右。本酶经特殊改造，具有超强扩增能力和延伸速度，扩增片段的长度可达 5-6 kb，延伸速度为 1 kb/ min（72℃）。该酶具有 5’→3’聚合酶活性和 3’→5’外切酶活性。扩增产物为平末端，不适合 TA 克隆。
以大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在 72℃、30 min 内，将 10 nmol 脱氧核糖核苷酸掺入到酸不溶物中所需的酶量，定义为一个活性单位（U）。
浓度：2U/μl
保存条件：-20℃保存特点
Ø 热稳定性好：98℃下半衰期超过 40 min；
Ø 保真性最高：保真性是Taq DNA 聚合酶的 10 倍；
Ø 不耐受 dUTP、dITP；
Ø PCR 产物具有平滑末端，可直接用于平端克隆。适用范围
Ø 高保真性PCR 扩增；
Ø 制备基因克隆或蛋白表达用的PCR 产物；
Ø 平末端 PCR 克隆(去除 3’突出端)；
Ø 位点特异性突变。产品包装规格及组成
Component | AE0201A/ AE0202A* | AE0201B/ AE0202B* | AE0201C/ AE0202C* | AE0201D/ AE0202D* |
Pfu DNA polymerase | 250U | 250U×5 | 1250U×4 | 2500U×5 |
10×Pfu Buffer | 0.5 ml×1 | 1.0 ml×3 | 5.0 ml×2 | 5.0 ml×5 |
2 mM dNTPs | -/0.5 ml×1 | -/1.0 ml×3 | -/5.0 ml×2 | -/5.0 ml×5 |
*附带 2mM dNTP 混合物。质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶污染。PCR 方法检测无宿主残余 DNA。
室温放置一周，扩增活性无明显改变；但强烈建议不要在室温下长期放置，用毕放回-20 度。酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.1% Nonidet P40, 0.1% Tween
20, and 50% glycerol.
注：以下反应举例为 50 μl 标准PCR 体系， 仅供参考。实际 PCR 条件应根据模板、引物、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×Pfu Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | Varable* | / |
Pfu（2U/μl） | 0.5 | 1U |
ddH2O | Varable | / |
总体积 | 50 | / |
*DNA template 可参照如下标准（50 μl PCR 体系）：
l 人类基因组 DNA | 0.1 μg-1 μg |
l λDNA | 0.5 ng-5 ng |
l 质粒 DNA | 0.01 ng-1 ng |
l 大肠杆菌 DNA | 10 ng-100 ng |
PCR 反应条件
95℃ | 5min | |
95℃ | 15sec |
|
55~72℃ | 20 sec | 30 Cycles |
72℃ | 1kb/min | |
72℃ | 5 min |
注意事项
l Pfu DNA 聚合酶具有很强的 3’外切核酸酶活性，因此在 PCR 产物 3’为平末端，不适合 TA
克隆。要进行 TA 克隆需用 Taq DNA 聚合酶对 PCR 产物进行加 A 处理。
l Pfu DNA 聚合酶为高保真酶，忠实性是 Taq DNA 聚合酶的 18 倍。
l 建议在冰上配置 PCR 反应液后，再放入PCR 仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性， 减少非特异性扩增，得到良好的PCR 结果。
l 如进行 PCR 扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的酶用量，以增加PCR 扩增反应的特异性。
l 本公司 Buffer 经大量 PCR 反应实例优化而成，然而对某些PCR 反应存在一个最优的镁离子浓度。若需要优化镁离子浓度，请购买本公司不含镁离子的 Buffer 和 MgCl2/MgSO4。
l 因该酶与含有尿嘧啶和次黄嘌呤的 DNA 模板结合后会抑制 DNA 聚合反应，故 dUTP、dITP
和含有这些核苷酸的引物不能用于 Pfu DNA 聚合酶催化的 PCR 扩增。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l Pfu DNA 聚合酶具有很强的 3’外切核酸酶活性，因此在 PCR 产物 3’为平末端，不适合 TA
克隆。要进行 TA 克隆需用 Taq DNA 聚合酶对 PCR 产物进行加 A 处理。
l Pfu DNA 聚合酶为高保真酶，忠实性是 Taq DNA 聚合酶的 18 倍。
l 建议在冰上配置 PCR 反应液后，再放入PCR 仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性， 减少非特异性扩增，得到良好的PCR 结果。
l 如进行 PCR 扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的酶用量，以增加PCR 扩增反应的特异性。
l 本公司 Buffer 经大量 PCR 反应实例优化而成，然而对某些PCR 反应存在一个最优的镁离子浓度。若需要优化镁离子浓度，请购买本公司不含镁离子的 Buffer 和 MgCl2/MgSO4。
l 因该酶与含有尿嘧啶和次黄嘌呤的 DNA 模板结合后会抑制 DNA 聚合反应，故 dUTP、dITP
和含有这些核苷酸的引物不能用于 Pfu DNA 聚合酶催化的 PCR 扩增。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
