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超耐热内切核酸酶IV | 目录号：AE1145 | 使用前请仔细阅读说明书 |
产品说明
核酸内切酶 IV是一种脱嘌呤/脱嘧啶（AP）位点特异性的核酸内切酶，在DNA 上的完整 AP 位点的5’端第一个磷酸二酯键处切割DNA，产生 3´ 羟基和 5´ 脱氧核糖磷酸末端。除天然的AP位点外，各种人工合成的Spacer分子也能够被内切核酸酶IV有效切割，包括THF、Spacer C3、Spacer C12、Spacer 9，Spacer 18等。该酶也具有 3´二酯酶活性，能从 DNA 的 3´末端释放磷酸甘油醛（phosphoglycoaldehyde）、α,β-不饱和醛（α,β-unsaturated aldehydes）、3’-磷酸、其它3' blocking groups。该酶还能够作用于 DNA 分子上的几种氧化性损伤，水解氧化损伤碱基的5’端第一个磷酸二酯键。 另外，该酶还具有3´-5´的外切酶活性。酶活性受到金属离子、DTT、EDTA等的影响，优先作用于3´凹末端的双链DNA，该外切酶活性弱于AP位点特异性的内切酶活性。
本公司超耐热内切核酸酶IV是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1 活性单位指在65℃，AM Buffer C中1小时切割 1 pmol 含一个 AP 位点的 34 mer 寡核苷酸双链所需要的酶量。
活性测定条件
AM Buffer C：50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT（pH 7.9 @ 25℃），37℃ 温育。
AP 位点底物制备方法如下：37℃ 条件下，用 1 单位尿嘧啶-DNA 糖苷酶（UDG）处理 10 pmol 含一个尿嘧啶碱基的 34 mer 寡核苷酸双链 2 分钟。
浓度：10U/ul。
保存条件：-20℃保存
特点与应用
Ø 与高温UDG一起改善高忠实性DNA聚合酶PCR扩增性能
Ø 单细胞凝胶电泳（彗星试验）
Ø DNA损伤检测
Ø 切断DNA中的各种Spacer
产品包装规格及组成
Component | AE1143A | AE1143B |
超耐热内切核酸酶IV | 500U | 2500U |
10×AM Buffer C | 0.2ml | 1ml |
质量控制
核酸内切酶 IV 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
10 mM Tris-HCl，250 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，200 µg/ml BSA，0.15% Triton® X-100，50% Glycerol，pH 7.4 @ 25°C
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应用举例
改善PCR扩增效果的使用方法
1. 按如下表格配制PCR反应液
PCR 组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×Pfu酶Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
Pfu DNA聚合酶（2U/μl） | 0.5 | 1U |
耐热UDG（2U/μl） | 1.0 | 2U |
超耐热内切核酸酶IV(10U/ul) | 1.0 | 10U |
ddH2O | Varable | / |
总体积 | 50 | / |
2. PCR反应。
3. 电泳检测PCR扩增结果。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 彗星试验的推荐稀释度：1:104至1:105。
l Endo IV在AM Buffer B中活性为100%，在AM Buffer D1中活性为25%。不建议在AM Buffer A中使用Endo IV。
l 本酶为高温酶，不能直接热失活。若需失活该酶可以进行酚氯仿抽提，或加入终浓度50mM EDTA并在95℃ 加热 20 分钟。
l 本酶有高浓度包装（200U/ul），在用于改善PCR扩增效果时建议使用高浓度包装，且每个PCR反应加入量为20-200U。
l 用于改善PCR扩增效果时，原理如下：高温UDG切除dU碱基产生无碱基AP位点，高温内切核酸酶IV断裂AP位点，并由DNA聚合酶进行延伸，修复成全长DNA片段。
l 本酶活性随温度升高而增强，具体应用建议在不同温度下摸索酶具体用量。
