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T4噬菌体复制分为依赖于起始子的起始复制和依赖于重组酶的复制。由起始复制产生的 3’-ssDNA作为重组复制的第一步链侵入的组份，该3’-ssDNA被T4 gp32蛋白（SSB）所覆盖，同时将T4 UvsY募集到此；T4 UvsY作为T4 UvsX的loader将其运载至此，与此同时gp32被置换下来，UvsX 和UvsY形成突触结构，然后侵入同源的双链形成D-Loop，一旦形成D-Loop，UvsX即被置换下来。D-loop结构的被置换链作为滞后链合成的模板，很快被gp32结合。随后，解旋酶loader蛋白 gp59与SSB蛋白gp32 覆盖的DNA复制叉结合，将gp41解螺旋酶和引物酶gp61运载至此，gp61引物酶蛋白合成引物片段促进滞后链上DNA的合成，而gp41通过解旋模板而促进先导链的DNA合成。最后，聚合酶的滑动钳gp45蛋白和其loader蛋白gp44/62与先导链相结合，促进聚合酶gp43的组装，滑动钳gp45将T4 DNA聚合酶gp43运载至复制叉处后启动先导链和滞后链的合成，滑动钳loader 蛋白gp44/62随后从复制叉处解离。
因此，gp59作为解旋酶gp41的loader在gp41引导的DNA先导链合成中起到重要作用。
本公司T4 gp59 Loader Protein是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白，大小约为26kDa。
浓度：1ug/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与适用范围
Ø 体外构建T4 DNA复制系统
Ø 促进T4 DNA解螺旋酶的组装
产品包装规格及组成
Component | AE1591A | AE1591B | AE1591C |
T4 gp59 Loader Protein | 0.1mg | 0.5mg | 2mg |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，5 mM DTT，50% Glycerol，pH7.5
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T4 DNA解螺旋酶gp41（AE1404）、T4 primase (AE1503)、T4 DNA聚合酶（A0501）、
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应用实例
RNA引物随机合成反应
1）按下表配制反应体系
反应组分 | ul |
10× Buffer | 5 |
2mM NTP +2 mM dNTP | 5 |
模板DNA | 100ng |
T4 gp59 Loader | 1 |
T4 gp41 Helicase | 1 |
T4 SSB | 1 |
T4 gp61 Primase（1ug/μl） | 1 |
T4 DNA polymerase(5U/ul) | 1 |
H2O | Variable |
总体积 | 50 |
2) 30-37℃保温30-60min；
3) 琼脂糖电泳检测扩增结果
4）按需进行后续实验，例如进行DNA合成反应。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项：
l 为了得到最佳的扩增效果，T4 复制体的各个蛋白组分的相对比例和浓度需要优化
