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产品说明
耐热 dUTPase 来源于嗜热微生物，能够水解 dUTP 生成 dUMP，从而消除 PCR 反应过程中产生的少量dUTP对 PCR的抑制作用。在 DNA聚合酶反应体系中，dCTP会自发进行脱氨基作用形成 dUTP，dUTP 抑制某些 DNA 聚合酶（特别是高忠实性DNA聚合酶）的活性，加入 dUTPase 可以消除 dUTP 对DNA聚合酶的抑制作用。dUTPase 的加入提高了 PCR 的产率、扩增片段长度和保真性，尤其在高保真性 DNA 聚合酶的 PCR 中非常实用。
本公司Thermostable dUTPase是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。比活性约为1.0×106U/mg。
活性定义
1活性单位指在85℃下，60 min催化10 nmol dUTP转化为dUMP所需的酶量。
浓度：0.1µg/ul（100U/ul）
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点与适用范围
Ø 提高 PCR 产量：由于减少了 dUTP 掺入引起的扩增抑制，能够显著提高 Pfu DNA 聚合酶等的扩增产量。
Ø 提高保真性：由于产量提高，用更少的循环可以获得有效扩增，进而减少突变机会。
Ø 增加扩增长度：dUTPase 的加入增加了扩增片段的长度。
产品包装规格及组成
Component | AE1821A | AE1821B | AE1821C |
Thermostable dUTPase | 10µg | 50µg | 200µg |
10× dUTPase Buffer | 0.3ml | 1.5ml | 5ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Glycerol，pH 8.0 @ 25°C
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
应用举例
按如下表格配制PCR反应液
体积/μl | 终浓度 | |
10×Pfu 聚合酶 Buffer | 5 | 1× |
dNTPs（2.0 mM） | 5 | 0.2 mM |
引物 F（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
引物 R（10 μM） | 1.5 | 0.3 μM |
Template | 1-5 | / |
Pfu 聚合酶（2U/μl） | 0.5 | 1U |
耐热 dUTPase（5U/μl） | 1.0 | 100ng |
ddH2O | Varable | / |
总体积 | 50 | / |
按常规程序进行PCR反应。
注意事项
l 50μl PCR反应体系中加入1ul dUTPase (扩增目的片段小于3.0kb时) 或 2ul的 dUTPase (扩增目的片段大于3.0kb时)。
l 高浓度的 dUTPase可能会抑制 PCR反应。
