本酶催化所有磷酸单酯的水解，不能催化磷酸二酯及磷酸三酯的水解。这种酶也能催化ATP等焦磷酸键的水解，主要用于DNA与RNA的5’末端磷酸基团的去除。

本公司Alkaline Phosphatase (E. coli)是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1活性单位指在25℃下， 1× Alkaline Phosphatase反应缓冲体系下，1 min内水解对硝基苯磷酸盐生成 1 μ mol的对硝基苯酚所需的酶量。本酶比活性约100U/mg。

活性测定条件

1× Alkaline Phosphatase Buffer：50 mM Tris-HCl，pH9.0，1 mM MgCl₂

浓度：0.5U/μl

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点与适用范围

Ø  在用32P标记5’-末端之前，去除RNA或DNA的 5’-末端的磷酸基。

Ø  去除载体DNA片段的5’-末端磷酸基，便于T4 DNA Ligase连接反应。

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

50 mM Tris-HCl，100 mM KCl，1 mM MgSO₄，50% Glycerol，pH8.0

使用实例：DNA的5’末端去磷酸化反应

1）按下表配制反应体系

2）37℃×60min反应，

3）75℃×15min失活酶，

4）尿素变性PAGE电泳检测酶切产物，或按实验目的进行后续操作。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  本酶是一种稳定性很高、反应需要Zn²⁺；

l  EDTA存在下100℃加热可暂时性失活，恢复至室温时酶活性恢复，需苯酚处理完全失活；

l  本酶合适pH在8.0附近；

l  Tris等醇类化合物可使其活性提高。

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