产品说明

热敏碱性磷酸酶（Thermolabile Alkaline Phosphatase）催化磷酸单酯的水解，但不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解。本酶来源于嗜冷细菌，在25-50℃范围内活性均较高。由于来自于嗜冷细菌，因此热稳定性非常低，通过65℃热处理15分钟，或70度热处理5分钟，可使本酶不可逆失活。

本公司热敏碱性磷酸酶是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。

活性定义

1 活性单位指在 37℃ 条件下，30 分钟能使 1μg 经 HindIII（产生 5´ 突出末端）、EcoRV（产生平齐末端）或 PstI（产生 5´ 凹陷末端）消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 ＞ 95% 的 DNA 再环化（通过连接产物转化E. coli感受态细胞来检测）。

活性测定条件

活性测定反应液组成：50 mM Bis-Tris-Propane-HCl，1 mM MgCl₂，0.1 mM ZnCl₂（pH 6.0 @ 25℃）。

浓度：5U/μl

保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融

特点

Ø  25-50℃范围内活性都比较高

Ø  热敏感性高，65℃加热15分钟，或70度加热5分钟完全失活

适用范围

Ø  去除DNA分子的5’磷酸基团

Ø  与Exonuclease I合用，对PCR产物进行测序前处理。

产品包装规格及组成

质量控制

经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

酶贮存缓冲液

50 mM Tris-HCl，100 mM KCl，1 mM MgSO₄，50% Glycerol，pH8.0

使用实例：

1、DNA的5’末端去磷酸化反应

1）按下表配制反应体系

2）30-45℃×15-60min反应，

3）65℃×15min或70℃×5min失活酶，

4）利用PCR产物纯化柱，纯化处理的DNA片段，或按实验目的进行后续操作。

2、PCR 产物测序前的处理。

1）按下表配制反应体系

2）37℃×30min反应，

3）70℃×15min失活酶，

4）分取上述反应液1μl～2μl，必要时最多5μl，进行后续的测序反应。

警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。

注意事项

l  5 units的本酶和1 μg的λ DNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

l  5 units的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。

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