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产品说明
Alkaline Phosphatase (TAB5)催化磷酸单酯的水解，但不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解。Alkaline Phosphatase (TAB5)来源于嗜冷细菌，在25-50℃范围内活性均较高。由于来自于嗜冷细菌，因此热稳定性非常低，通过65℃热处理15分钟，或70度热处理5分钟，可使本酶不可逆失活。
本公司Alkaline Phosphatase (TAB5)是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
活性定义
1 活性单位指在 37℃ 条件下，30 分钟能使 1μg 经 HindIII（产生 5´ 突出末端）、EcoRV（产生平齐末端）或 PstI（产生 5´ 凹陷末端）消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化标准是指在自连接反应中能抑制 ＞ 95% 的 DNA 再环化（通过连接产物转化E. coli感受态细胞来检测）。
活性测定条件
活性测定反应液组成：50 mM Bis-Tris-Propane-HCl，1 mM MgCl2，0.1 mM ZnCl2（pH 6.0 @ 25℃）。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融
特点
Ø 25-50℃范围内活性都比较高
Ø 热敏感性高，65℃加热15分钟，或70度加热5分钟完全失活
适用范围
Ø 去除DNA分子的5’磷酸基团
Ø 与Exonuclease I合用，对PCR产物进行测序前处理。
产品包装规格及组成
Component | AE1807A | AE1807B |
Alkaline Phosphatase (TAB5) | 500U | 2500U |
5×Alkaline Phosphatase (TAB5) Buffer | 0.3ml | 1.5ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶贮存缓冲液
50 mM Tris-HCl，100 mM KCl，1 mM MgSO4，50% Glycerol，pH8.0
使用实例：
1、DNA的5’末端去磷酸化反应
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 2ul |
底物（5’ 磷酸化DNA） | 0.1-5ug |
TAB5碱性磷酸酶 (5U/µl) | 1-2ul |
H2O | Variable |
总体积 | 20ul |
2）30-45℃×15-60min反应，
3）65℃×15min或70℃×5min失活酶，
4）利用PCR产物纯化柱，纯化处理的DNA片段，或按实验目的进行后续操作。
2、PCR 产物测序前的处理。
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
PCR 扩增后的反应液 | 16ul |
TAB5碱性磷酸酶 (5U/µl) | 1ul |
Exonuclease I（20 U/μl） | 0.5ul |
灭菌水 | 7.5ul |
总体积 | 25ul |
2）37℃×30min反应，
3）70℃×15min失活酶，
4）分取上述反应液1μl～2μl，必要时最多5μl，进行后续的测序反应。
注意事项
l 5 units的本酶和1 μg的λ DNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
l 5 units的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时，RNA的电泳谱带不发生变化。
