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T4 DNA polymerase是来自于T4噬菌体的DNA聚合酶，分子量为104kDa，可以催化5´→3’方向的脱氧核糖核酸合成，需要模板和引物的存在。该酶具有3´→5´核酸外切酶活性，且活性比E.coli DNA polymerase I的Klenow fragment高100-1000倍。该酶不具有5´→3’核酸外切酶活性。
本公司T4 DNA polymerase 是重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。
单位定义
1单位指在温度为37℃，30min内将10nmol dNTP掺入酸不溶性物质所需的酶量。
活性测定条件
1× T4 DNA Polymerase Buffer：33 mM Tris-acetate pH7.9， 66 mM KAc ，10 mM Mg(Ac)2，0.5 mM DTT，0.1mg/ml BSA。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃可保存2年，避免反复冻融。
特点
Ø 无链置换活性
Ø 无5’-3’外切酶活性，不能进行切口平移
Ø 合成错误率~ 1×10-6 bases
Ø 热失活：75°C for 20 min
应用
Ø 缝隙填充(无缺口平移活性)
Ø 去除3’突出单链或补平5’突出单链，形成平末端
Ø 生成无缝克隆中的5’突出端，实现基因和载体的互补配对
产品包装规格及组成
Component | AE0501A | AE0501B |
T4 DNA polymerase | 200U | 1kU |
10×T4 DNA polymerase Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
0.1% BSA（1mg/ml） | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
酶保存液
20 mM Tris-HCl，200 mM NaCl，10 mM MgCl2，5mM DTT，50% Glycerol，pH 7.5。
注意事项
l 由于该酶具有很强的3´→5´ 核酸外切酶活性，提高反应温度、增加酶量、没有加入 dNTP 或反应时间过长都可能造成 DNA 末端碱基被切除形成3’端凹陷。
l 适用于凹陷单链区聚合补平反应（聚合酶反应）的缓冲液包括：AM Buffer A-D、A1-D1、T4 DNA连接酶反应缓冲液。
l 适用于突出单链区水解削平反应（3’外切酶反应）的缓冲液包括：AM Buffer A、B、D、A1、B1、D1、T4 DNA连接酶反应缓冲液；不建议使用AM Buffer C和C1。
l 鉴于AM Buffer B2是此酶最优Buffer，当使用不包含BSA的缓冲液时，建议补充BSA。
l Activity in AM Buffers：AM Buffer A: 60% ；AM Buffer B、C、D: 100%。
l 离子强度超过100 mM时活性将被抑制，SH基的还原剂促进活性。
l 活性易受模板DNA高级结构的影响，T4 gene 32（T4 SSB）蛋白可以显著提高聚合酶活性，完全抑制3′→5′外切核酸酶活性。
相关产品
AE1904: T4 gene 32（T4 SSB）
应用实例
1. 去除3’突出单链或补平5’突出单链，形成平末端
1）按下表配制反应体系
反应组分 | ul |
10× Buffer | 2 |
2mM dNTP | 2 |
底物：3’突出或5’突出DNA | 100ng-1µg |
T4 DNA polymerase (5U/µl) | 1 |
0.1%BSA | 2 |
H2O | Xul |
总体积 | 20 |
2）37℃×30min反应，
3）75℃×15min失活酶，
按需进行后续实验。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 由于该酶具有很强的3´→5´ 核酸外切酶活性，提高反应温度、增加酶量、没有加入 dNTP 或反应时间过长都可能造成 DNA 末端碱基被切除形成3’端凹陷。
l 适用于凹陷单链区聚合补平反应（聚合酶反应）的缓冲液包括：AM Buffer A-D、A1-D1、T4 DNA连接酶反应缓冲液。
l 适用于突出单链区水解削平反应（3’外切酶反应）的缓冲液包括：AM Buffer A、B、D、A1、B1、D1、T4 DNA连接酶反应缓冲液；不建议使用AM Buffer C和C1。
l 鉴于AM Buffer B2是此酶最优Buffer，当使用不包含BSA的缓冲液时，建议补充BSA。
l Activity in AM Buffers：AM Buffer A: 60% ；AM Buffer B、C、D: 100%。
l 离子强度超过100 mM时活性将被抑制，SH基的还原剂促进活性。
l 活性易受模板DNA高级结构的影响，T4 gene 32（T4 SSB）蛋白可以显著提高聚合酶活性，完全抑制3′→5′外切核酸酶活性。
