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产品说明
phi29 DNA聚合酶是嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的噬菌体phi29编码的DNA聚合酶。此酶具有卓越的链置换和连续合成特性，并具有3´→5´ 核酸外切酶校读活性。本公司phi29 DNA polymerase为重组表达，并经多步纯化制备的重组phi29 DNA polymerase。
活性定义
1活性单位指在30℃下， 1× phi29 DNA Polymerase反应缓冲体系下，10 min内将0.5 pmol dNTP掺入酸不溶性物质所需的酶量。
活性测定条件
50 mM Tris-HCl ，10 mM MgCl2 ，10 mM (NH4)2SO4 ，4 mM DTT ，(pH 7.5 @ 25°C)，100 µg/ml BSA。
浓度：30U/μl
保存条件：-20℃保存
特点
Ø 缺乏5’ →3’ 核酸外切酶活性
Ø 超强链置换能力
Ø 超强连续合成能力
Ø 扩增的高保真性
Ø 热失活65℃×10min
适用范围
Ø 缝隙填充(无切口平移活性)
Ø 链置换和DNA连续合成反应
Ø 常温下DNA高忠实性快速滚环复制
Ø 单分子长片段DNA高保真合成
产品包装规格及组成
Component | AE0503A | AE0503B |
phi29 DNA Polymerase | 1kU | 5kU |
10×phi29 DNA Polymerase Buffer | 0.2ml | 1.0ml |
质量控制
相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。
酶贮存缓冲液
10 mM Tris-HCl，100 mM KCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，0.5% Tween® 20，0.5% IGEPAL® CA-630 ，pH 7.4@ 25°C。
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应用实例
1. 滚环复制
1）按下表配制反应体系
反应组分 | 体积或浓度 |
10×Buffer | 2 |
2mM dNTP | 2 |
硫代修饰的6N随机引物 | 10-100p |
模板：质粒或基因组DNA | 100ng-1µg |
*phi29 DNA Polymerase (30U/µl) | 1 |
H2O | Variable |
总体积 | 20 |
2）95度加热5min，放冰上5min
3）加入phi29 DNA Polymerase ，
4）30℃×60min反应，
5）75℃×15min失活酶，
6）按需进行后续实验。
*先加热变性模板DNA，并在冰上放5min退火，然后再加入phi29 DNA Polymerase，进行滚换复制。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 特殊情况下可在反应Buffer中额外添加终浓度1 mM DTT和0.2 mg/ml BSA，提高反应效率。
l 根据实验类型需要，调整dNTP的浓度100~500 μM。
l 添加Yeast Pyrophosphatase可提高DNA产量。
l 反应引物3’端的硫代修饰可避免引物降解。
