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产品说明
E. coli DNA polymerase I是大肠杆菌的一种DNA依赖性DNA聚合酶，除了5´→3´ DNA聚合酶活性，还具有3´→5´ 和5´→3´ 核酸外切酶活性。5´→3´ 核酸外切酶活性可以消化正在延伸的DNA链下游的5’核苷酸，进行缺口平移反应。
本公司E. coli DNA polymerase I 是在大肠杆菌中重组表达，并经多步纯化的重组大肠杆菌DNA polymerase I。
活性定义
1单位指在反应温度37℃，1× E .coli DNA polymerase I 反应缓冲体系的条件下，30 min将10 nmol dNTP掺入酸不溶性物质所需的酶量。
活性测定条件
50 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，0.1 mM DTT pH7.8@25℃，37℃温育。
浓度：5U/μl
保存条件：-20℃保存
特点
Ø 具有3´→5´ 和5´→3´ 核酸外切酶活性
Ø 热失活75℃×20min
适用范围
Ø DNA的缺口平移，获得高比活性探针
Ø 第二链cDNA合成
产品包装规格及组成
Component | AE0601A | AE0601B |
E. coli DNA polymerase I | 500U | 2.5kU |
10× E. coli DNA polymerase I Buffer | 0.5ml | 1.0ml×2 |
质量控制
相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。
酶贮存缓冲液
25 mM Tris-HCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，50% Glycerol，pH 7.4 @ 25°C。
注意事项
l 具有5´→3´外切酶活性，不能用于链置换DNA合成反应。
l E. coli DNA聚合酶I在本公司四种Buffer A-D中都有活性。
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应用实例
1. 切口平移
1）按下表配制反应体系
反应组分 | ul |
10× Buffer | 4 |
dNTP（0.1mM dATP,dGTP,dTTP） | 4 |
*[γ- 32P]dCTP（3000 Ci/mmol） | 10 |
！底物：模板DNA | 50ng-1µg |
E. coli DNA polymerase I (5U/µl) | 1 |
！DNase I（0.0004 U/μl） | 1 |
H2O | Variable |
总体积 | 40 |
2）37℃×120min反应，
3）70℃×15min保温，失活酶
4）取适量作为杂交反应的探针使用（若有必要，可通过凝胶过滤或乙醇沉淀除去未掺入的dCTP）
按需进行后续实验。
*也可以用其它标记的（例如cy3荧光标记的dCTP）的单一dNTP作为标记底物。
！用来在模板DNA中间形成缺口，作为聚合酶切口平移的反应位点。若模板DNA本身已经带有切口或缺口，则不用添加DNase I。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 具有5´→3´外切酶活性，不能用于链置换DNA合成反应。
l E. coli DNA聚合酶I在本公司四种Buffer A-D中都有活性。
