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产品说明
Bst DNA polymerase (Large Fragment)又称Bst DNA聚合酶大片段，是来自于嗜热细菌Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的蛋白酶水解大片段，具有5´→3´ DNA 聚合酶活性，但缺失5´→3´ 核酸外切酶活性。
本公司Bst DNA polymerase Large Fragment 是重组表达，并经多步纯化的重组酶。
活性定义
1单位指在温度为65℃，1× AM Buffer E缓冲体系的反应条件下，30min内将10 nmol dNTP掺入酸不溶性物质所需的酶量。
活性测定条件
AM BufferE ，65℃温育。
浓度：8U/μl
保存条件：-20℃保存
特点
Ø 5´→3´核酸外切酶活性缺失
Ø 极强的链置换合成能力
Ø 热失活85℃×5min
适用范围
Ø DNA等温扩增
Ø 富含GC的DNA扩增
Ø 纳克级DNA模板的快速扩增
Ø 可用于高温链置换DNA合成
产品包装规格及组成
Component | AE0605A | AE0605B |
Bst DNA polymerase (Large Fragment) | 800U | 4kU |
10×AM Buffer E | 0.5ml | 1.5ml |
10×AM Buffer H | 0.5ml | 1.5ml |
质量控制
相关测试表明无外源内切、外切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法检测无宿主残余DNA。
酶贮存缓冲液
10 mM Tris-HCl，50 mM KCl ,1 mM DTT，0.1 mM EDTA ，0.1% Triton® X-100，50% Glycerol，pH 7.1 @ 25°C。
注意事项
l 建议反应温度不要超过 70℃。Bst DNA 聚合酶大片段不能用于热循环测序或 PCR。
l Mg2+的使用浓度为 4~10 mM 浓度，通常在 6-8 mM Mg2+条件下可获得较好的 LAMP 结果。
l 有文献报道加入 Tte UvrD或Tth UvrD 解旋酶可改善 LAMP 的效果，本公司有售Tte UvrD（AE1401）和Tth UvrD（AE1402）。
l 使用无模板 DNA 作为对照检测扩增的特异性。
l 长期保存需要添加0.1mg/ml BSA或0.1%Triton X-100。
l 不同等温扩增的反应条件有所差异，昂酶等温扩增Buffer（AM Buffer H）可提高扩增效果。
应用实例
1. LAMP等温扩增——电泳法检测
1）按下表配制反应体系
组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×AM Buffer H | 2.5 | 1× |
引物 FIP（10 μM） | 4 | 1.6 µM |
引物 RIP（10 μM） | 4 | 1.6 µM |
引物 F3 （10 μM） | 0.5 | 0.2 µM |
引物 R3 （10 μM） | 0.5 | 0.2 µM |
引物 loop-F （10 μM） | 1 | 0.4 µM |
引物 loop-R （10 μM） | 1 | 0.4 µM |
dNTPs（10.0 mM） | 3 | 1.2 mM |
100mM MgSO4 | 1.5 | 6 mM |
Template（10ng/ul）* | 1 | 0.1-10ng |
ddH2O | variable | / |
总体积 | 25 | / |
加入1ul Bst DNA polymerase 大片段（8U/ul），65℃保温30-60min；
跑胶检测DNA扩增结果
按需进行后续实验。
2. LAMP等温扩增——荧光法实时检测
1）按下表配制反应体系
组份 | 体积/μl | 终浓度 |
10×AM Buffer H | 2.5 | 1× |
引物 FIP（10 μM）！ | 4 | 1.6 µM |
引物 RIP（10 μM） | 4 | 1.6 µM |
引物 F3 （10 μM） | 0.5 | 0.2 µM |
引物 R3 （10 μM） | 0.5 | 0.2 µM |
引物 loop-F （10 μM） | 1 | 0.3 µM |
引物 loop-R （10 μM） | 1 | 0.3 µM |
dNTPs（10.0 mM） | 3 | 0.4 mM |
100mM MgSO4 | 1.5 | 6 mM |
SYBR Green（10×） | 5 | 1× |
Template（10ng/ul）* | 1 | 0.1-10ng |
ddH2O | variable | / |
总体积 | 25 | / |
2) 加入1ul Bst DNA polymerase 大片段（8U/ul），在qPCR仪于65℃保温30-60min；
3) 荧光检测DNA扩增结果
注意事项：
三对引物的浓度为参考值，可以根据具体的扩增反应进行优化。
dNTP终浓度可以根据不同实验需要，在0.4mM-1.6mM之间进行优化。
在加入Bst DNA polymerase 之前，可以95度加热5min，放冰上5min，有助于改善扩增效果。
本公司具有可视变色法、电泳法、荧光法LAMP试剂盒，使用时仅需加入引物和模板。
警告: 本产品仅限科研实验使用，临床应用安全性和有效性未鉴定，不可用于医疗临床诊断。
注意事项
l 建议反应温度不要超过 70℃。Bst DNA 聚合酶大片段不能用于热循环测序或 PCR。
l Mg2+的使用浓度为 4~10 mM 浓度，通常在 6-8 mM Mg2+条件下可获得较好的 LAMP 结果。
l 有文献报道加入 Tte UvrD或Tth UvrD 解旋酶可改善 LAMP 的效果，本公司有售Tte UvrD（AE1401）和Tth UvrD（AE1402）。
l 使用无模板 DNA 作为对照检测扩增的特异性。
l 长期保存需要添加0.1mg/ml BSA或0.1%Triton X-100。
l 不同等温扩增的反应条件有所差异，昂酶等温扩增Buffer（AM Buffer H）可提高扩增效果。
